大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒的試劑如何正確準備？

　　大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒是一個對滋養層細胞功能有自分泌作用和對血管生長有旁分泌作用的蛋白。
 

　　大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒試劑的準備方法：
 

　　1.使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
 

　　2.標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度，標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
 

　　3.濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。
 

　　大鼠胎盤生長因子ELISA試劑盒的操作步驟：
 

　　從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 

　　設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。
 

　　樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
 

　　除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 

　　棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 

　　每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
 

　　每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
 

　　結果判斷繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。